Normas de funcionamiento

Horario de recepción y entrega.

10-11 h - 13-14 h

Reservas de equipos.

La reserva de los equipos (criostatos) se hará de forma formal entrando en Intranet-Reservas-Aparatos. Además se deberán cumplir las reglas establecidas referentes al uso del equipamiento y funcionamiento general del mismo.
Se podrá reservar un máximo de 2 h por un mismo usuario y laboratorio y un máximo de 8 h a la semana.Si no se van a emplear las horas reservadas hay que anularlas, al menos con 1 hora de antelación.Si es con menos tiempo, avisar de todas formas al Servicio. Transcurrido 30 min desde el inicio de la reserva sin que se notifique motivos de retraso se procederá a su anulación por el Servicio y la llamada a los usuarios que estén en lista de espera de reserva.
Si se requieren más horas debido a las características de las muestras, ponerse en contacto con el Servicio que autorizará más o las repartirá según la demanda.
El criostato 1950, localizado en la Sala de Instrumentación,( 2ª planta IIB2) podrá ser utilizado, además de por el Servicio, por usuarios autorizados y bajo la supervisión del personal del Servicio.Los usuarios autorizados, son aquellos que la responsable acredite que tienen experiencia suficiente en el manejo de ese equipo para su uso.
Si existe cualquier duda, problema o fallo de funcionamiento del equipo deberá ser comunicado con la mayor brevedad posible al responsable del servicio a través de la página de incidencias (Cyberlar- Incidencias-Histología)o telefónicamente.

Normas de entrega de muestras.

El usuario deberá realizar la petición de servicio que se obtiene vía intranet/compras/histología antes de la entrega de las muestras. En Notas indicar: orientación de los órganos, si hay que realizar algún corte previo, zona a cortar,número de portas/muestra,si se quiere poner varias muestras distintas en cada portaobjetos o cualquier requisito específico.
Para facturaciones con cuentas externas el usuario deberá rellenar la solicitud correspondiente y entregarla en el servicio junto con las muestras.
Ambos, al entregar las muestras deben rellenar el cuaderno de registro de recepción de muestras y preparaciones para histología
Las muestras deben estar rotuladas de forma clara indicando el nombre del investigador principal (iniciales) o laboratorio y numeradas con el código propio ( nº consecutivos).Rotular los casettes con lápiz.Enviar un excel o lista al servicio con las muestras entregadas.
Para muestras congeladas humanas indicar si la muestra ha sido fijada previamente.

Normas de recogida de muestras por el usuario

El personal de Histología una vez finalizado todas las prestaciones solicitadas y después de revisarlas,se pondrá en contacto con la persona asignada para indicarle que recoja las preparaciones.
Las muestras estarán en la mesa de la entrada del Servicio rotuladas con nombre del investigador/Usuario y nº de pedido.. Revisar y firmar en la hoja de registro de recogida de muestras.
Las muestras para corte con el criostato se pueden dejar en el ultracongelador nº2 localizado en el sótano en P. Animalario en el cajón destinado al Servicio de Histología ( balda 5)y en la bandeja del B-39. Las cajas con las muestras deben ir perfectamente identificadas con el usuario y el nombre del Servicio de Histología. Avisad de la entrega y recogida del material y firmar en los cuadernos correspondientes.

1. Preparación de bloques de parafina.

Las muestras deberán ser fijadas en paraformaldehído 4% o formaldehído (según criterio del investigador) con un volumen 20 veces mayor que la muestra. Las muestras deberán tener un tamaño apróximado de 1 cm³.
Permanecerán con el fijador toda la noche a 4º o 1-2 h temperatura ambiente. El tiempo de fijación dependerá de la procedencia y tamaño de la muestra.
Si se va a tardar más de 24 horas en entregar la muestra, realizar lavados en PBS 1x 30 min ( 2-3 veces) y reservar a 4º hasta su entrega.
Reflejar en las notas en el cuaderno de registro cuánto tiempo lleva con el fijador o si se entrega en PBS1x o en etanol 70%.Se recomienda la entrega de las muestras dentro del casette de inclusión (solicitar previamente), ya cortada y limpia.Si se solicita un corte previo al procesamiento, indicar y en que plano realizar el corte, así como si es necesario descalcificar.

2. Preparación de bloques de OCT.

Los bloques de OCT se pueden preparar con fijación o sin fijación.
Para la realización de bloques de OCT por el servicio, las muestras se fijan en paraformaldehído o formaldehido 4% y después deben pasar por sacarosa al 30% (en PBS 1x) como mínimo O/N. Se podrá entregar tanto en el fijador como en la sacarosa.

3. Secciones en parafina y congelados.

Indicar el nº de portas que se requiere de cada muestra y si se requiere un número de cortes determinado en cada porta. Si no se indica lo contrario, los cortes se realizan a 5 micras.
La facturación se realiza en intervalos de 10 portas cortados o de 5 portas cortados.Se factura por porta no por corte.
Entregar las cajas necesarias para colocar los portaobjetos con los cortes.
Para cortes en flotación, indicar cuantas la serie de cuantos nº es de para cada muestra. Proporcionar los eppendorf o placas y el líquido anticongelante.Se factura por muestra.
Adicionalmente se pueden entregar directamente los bloques de parafina, de OCT o de gelatina para su procesamiento posterior.

4. Tinciones

Además de las tinciones ofertadas en la web ( HE/E, Oil Red O/HE, Nissl) se pueden entregar los colorantes específcos de la tinción y realizarla el servicio solicitandose como" Otras tinciones cortes parafina"

TARIFAS:

Normas de uso del criostato 1950

A.Normas generales de acceso y reserva

Sólo las personas autorizadas y con experiencia previa en estos equipos podrán utilizarlos. Los problemas ocasionados por su mal uso serán responsabilidad del usuario y en última instancia del investigador principal. Estos usuarios deben conocer y acatar las normas de funcionamiento, limpieza y seguridad establecidas por el Servicio. Deben estar registrados en el registro de usuarios autónomos del criostato.
Para hacer un uso adecuado de los equipos, los usuarios sin experiencia previa deberán contactar con la responsable del Servicio.
Sólo se podrán reservar 2 horas por usuario/laboratorio y 8h a la semana. En el caso de que quede alguna hora libre y con el permiso del personal del Servicio se podrán utilizar reservándose previamente ( se podrá pedir su anulación si lo solicita algún usuario que no tiene ninguna hora reservada).
Se controlará el acceso a la sala de instrumentación donde se encuentran los criostatos. Para tener acceso a la misma, se debe pedir la llave en recepción y rellenar el cuaderno correspondiente ( usuario, laboratorio, hora de entrada y salida, incidencias). El usuario se hace responsable de cerrar la sala y de la devolución de la llave a recepción tras la finalizar el uso.
El material de limpieza y accesorio( etanol, pinceles, cuchillas,OCT,portas) debe ser traído por cada usuario.
Es obligatorio hacer la reserva. Si no se va a utilizar la reserva, será preciso anularla con al menos 1 hora de antelación y avisar mediante e-mail para al resto de los usuarios. La reserva se realizar vía intranet. Si no hay ninguna reserva se informará a Histología para incluir en una lista y se llamará en cuanto se anule una reserva.

B. Normas generales del uso del criostato

BLOQUEAR la manivela cada vez que se coloca la muestra o se mueve. Al finalizar el trabajo volver a bloquearla.
- Antes de empezar a cortar recordar desbloquear la manivela y no forzarla estando con el freno.
- NO TOCAR el botón de nieve descongelándose.
- NO CAMBIAR el ángulo del portacuchillas. Recomendado entre la posición 3-5.
- Asegurarse de que el anti-roll esté bien colocado para evitar fricción durante el corte (placa anti-roll sobresale demasiado del filo de la cuchilla)ya que puede dañarse la placa anti-roll. Evitar rallar la placa.
Para evitar vibraciones que pueden variar el grosor del corte:
- Apretar bien la manivela para orientar la muestra.
- Colocar suficiente OCT en el portamuestra antes de colocar la muestra Realizar el proceso a temperatura ambiente. Una vez colocada la muestra ,introducir en la cámara del criostato.
- Observar que estén bien apretadas las 2 palancas de sujeción para mover el portacuchillas y la palanca para ajustar la cuchilla.
- El portacuchillas no debe estar muy fuera ( por lo menos a 1cm del borde exterior). Al comenzar a trabajar hay que adelantar el portacuchillas lo máximo posible a la muestra y no al revés ( mover el brazo y acercar el brazo a la cuchilla)
- Si cuando estas cortando observas demasiado hacia fuera el brazo, échalo hacia atrás y acerca el portacuchillas.
Al finalizar el trabajo:
- Quitar la cuchilla
- Si se ha quitado la placa anti-roll, volver a colocarla en su sitio.
- Dejar el brazo echado hacia atrás hasta el tope y BLOQUEADO.
- Limpiar con ETANOL 70% ( nunca con agua)los restos que hayan podido quedar en las bandejas o dentro de la cámara.
- Asegurase que todas las manivelas de sujeción están apretadas
- Colocar los discos portamuestras en su sitio y limpiar los restos con etanol.
- Dejar cerrada la puerta de vidrio de la cámara del criostato
- Si se ha cambiado la temperatura volver a poner la que te encontrastes.
- Apagar la luz de la cámara.
- Rellena el cuderno de registro del criostato, indicando la fecha y hora de entrada y de salida.
- Desconecta la refrigeración del portamuestras.

NOTA: Si mantienes pulsada la tecla "Llave" durante más de 5 segundos se bloqueará el equipo. La señal que está bloqueado es que desaparecen los : en medio de los datos de hora/min en el panel del reloj. Para desbloquear se vuelve a mantener apretada la tecla " Llave" durante 5 segundos hasta que vuelven a aparecer los : en el panel del reloj.

No apagar la refrigeración de la cámara.
No dejar material sobre las poyatas.
No apagar el nunca el aire acondicionado ni variar la temperatura.
Cerrar la puerta con llave y devolverla a recepción

La responsabilidad última de la pérdida de material o un mal uso del equipo, será del último usuario registrado antes de la incidencia. P.ej. siempre debe haber dos discos portamuestras. En el caso de problemas con el equipo contactar rápidamente con la responsable, Yolanda Ortega (yortega@iib.uam.es o al teléfono del Despacho de Histología ext 443865).

C.. Normas especificas del criostato 1950

Sólo pueden usarlo los usuarios autorizados por Histología. Para utilizarlo por la tarde será necesario pasar una supervisión previa dentro del horario del Servicio.
Para encender la refrigeración del portamuestras pulsa subsiguientemente la tecla + del panel de mandos para la refrigeración de la muestra y la tecla ´Llave´ hasta que se enciendan los números de este panel.
Para apagar la refrigeración del portamuestras pulsa subsiguientemente la tecla – del panel de mandos para la refrigeración de la muestra y la tecla ´Llave´ hasta que se apaguen los números del panel del portamuestras.
Si no hay ningún usuario reservado después de tí, sube la temperatura de la cámara a -15º cuando termines.

Normas de uso del dispensador de parafina común

No debe moverse de su ubicación